『刀使的巫女』动画的世界设定是自古以来就存在着危害人类生命的异形荒魂，同时有着依靠御刀来驱除这些荒魂的巫女，这些巫女会随身带刀也被认为称之为「刀使」，这些刀使隶属于日本警察的特別祭祀机动队，这个机动队的成员是拥有着国家承认的御刀超法规的国家公务员，她们基本都是来自日本全国五所初高中一贯制学校的女性学生，虽然表面上过着平常普通的学院生活，但一旦被履行自己的职务，就会手拿御刀发挥种种超越常人的力量为守护人类而战斗。在这个春天从这五所学校精选出来的刀使们聚集在一起，按照惯例举办五校间的竞技比赛，为了这个比赛很多刀使都在努力修炼中，而这其中有一个隐藏着格外强烈的思念，独自磨练自己技能的少女